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长期保存的组织样品要尽快冻存

2018-07-25 14:02:01 江苏韩孚化工科技有限公司 阅读

样品贮存的温度对有效保存时间的影响很大。选择合适的贮存方式和贮存温度很重要。但为了保证实验结果的客观性,研究者也要充分注意样品在贮存或固定前的处置时间和方式。样品从开始收获到固定或低温保存前这段时间,仍有一些生化过程在较快地进行。这些生化反应的速度直到样品被固定或者低温保存时才显著降低。这一段时间越短越好。对于手术切除的组织,热缺血(warm ischemia)时间越短越好;对于实验动物,处死取样时挣扎时间越短越好。这有助于防止因环境改变而导致基因表达水平或蛋白磷酸化状态产生较大变化。一些较复杂的手术可能进行几个小时甚至整天,那么较早被切割但未被切离的那部分组织可能经历较长的热缺血时间,从而导致较大的生化变化。为了尽可能减少热缺血的影响,一些手术室专门放置了液氮容器,组织一旦切下就被投入液氮进行急冻(snap freezing);对于耗时较长的手术,有人先在短时间内切下有代表性的小部分组织用于研究,然后再进行耗时较长的切除;有人在条件有限时,采用了将热缺血状态转为冷缺血(cold ischemia )状态的办法减少样品的变化。他们先把切下的组织置于冰上或4℃ 冰箱中放置短时间,方便时再将样品置于-80 ℃冰箱或液氮保存。总之,从样品开始采集到被冻存或固定,这段时间越短越好,一般不要超过20分钟。当然不同组织生化过程的变化快慢有异。当组织来不及冻存时,可将其剪成小块,放于组织保存液如RNAsafety™中。